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    简要描述:

    慢病毒是逆转录病毒的一种,具有逆转录病毒的基本结构和特性:整合入宿主细胞基因组,长期表达,可用于转基因动物制备;但也有不同于逆转录病毒的组份和特性:比逆转录病毒具有更高的滴度,不仅可以感染分裂期细胞,更重要的,还能感染非分裂期的细胞。利用慢病毒载体,可以研究启动子的调控、过表达特定基因或沉默特定基因。

    浏览量:1088

    更新时间:2022-09-28

     慢病毒包装服务

     慢病毒简介

        慢病毒是逆转录病毒的一种,具有逆转录病毒的基本结构和特性:整合入宿主细胞基因组,长期表达,可用于转基因动物制备;但也有不同于逆转录病毒的组份和特性:比逆转录病毒具有更高的滴度,不仅可以感染分裂期细胞,更重要的,还能感染非分裂期的细胞。利用慢病毒载体,可以研究启动子的调控、过表达特定基因或沉默特定基因。

    慢病毒包装技术特点

    病毒表达系统

    腺病毒表达系统

    慢病毒表达系统

    病毒基因组

    双链DNA病毒

    RNA逆转录病毒

    自主复制

    不能

    不能

    是否整合

    病毒基因组游离于宿主基因组外,瞬时表达外源基因

    病毒基因组整合于宿主基因组,长时间、稳定表达外源基因

    感染细胞类型

    感染绝大多数细胞,包括分裂期、非分裂期细胞。

    感染绝大多数细胞,包括分裂期、非分裂期细胞。

    表达丰度

    高水平表达

    中水平表达

    表达时间

    快(1-2 天)

    慢(2-4 天)

    滴度

    滴度可达10E12pfu/mL

    滴度可达10E9-10E10TU/mL

    克隆容量

    可插入高达8kb的外源片段,滴度随插入片段长度增加而降低

    可插入不超过8kb的外源片段,滴度随插入片段长度增加而降低

    免疫原性

    高免疫原性

    低免疫原性

    RNAi

    病毒进入细胞往往引起细胞内干扰素反应,一般情况下不适合做RNAi实验

    适合,是RNAi实验的优选工具

    基因过表达

    包装容量较大,可以满足较大基因的包装,是过表达基因的优选工具

    包装容量有限,过表达的基因过大时,病毒滴度受到影响

    过表达microRNA

    适合

    适合,是过表达microRNA实验的优选工具

    下调microRNA

    有报道但不成熟

    有报道但不成熟

    是否可以自行扩增

    可以

    需要特殊包装系统和包装环境

     

    慢病毒包装服务流程

    A. 慢病毒载体的构建:

    根据不同的研究需求构建慢病毒载体,如用于RNAi的慢病毒载体、用于基因过表达的慢病毒载体、用于启动子活性研究的慢病毒载体等;

    B. 慢病毒包装过程:

        将重组病毒质粒及其辅助包装质粒共转染至包装细胞中,收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液,对其浓缩后得到高滴度的慢病毒浓缩液,在293T细胞中测定并标定病毒滴度。

    C. 慢病毒包装结果:

    滴定浓度:1×107~1×108TU/ml

    zui终体积:1 ml纯化后的病毒液(储存于PBS)

    储存:批量储存的*条件为-80°C。

    慢病毒包装用途:

    慢病毒载体包装之后成为假病毒颗粒后,可用于:

    • 感染原代细胞;
    • 制备稳定表达/沉默特定基因的单克隆细胞株;
    • in vivo的基因操作;
    • 转基因动物,特别是转基因大鼠的制备。

     

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